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產(chǎn)品名稱:DNS試劑 生化試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):D7800

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):DNS試劑 生化試劑盒
有效期1年
儲(chǔ)存條件2-8℃
外觀(性狀)橘黃色透明溶液
北京索萊寶生產(chǎn)DNS試劑,可用于比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖曲線,是測(cè)植物總糖和還原糖檢測(cè)(硝基水楊酸法)的成分之一。

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D7800DNS試劑 生化試劑盒的詳細(xì)資料:

DNS試劑說明書

貨號(hào):D7800

規(guī)格:100mL/500mL

保存:4°C避光保存,12個(gè)月有效。

產(chǎn)品說明:

   植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)性狀,長以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基,具有還原性,屬于還原糖;多糖和蔗糖等屬于非還原糖??梢岳枚嗵悄鼙凰崴鉃閱翁堑奶匦酝ㄟ^測(cè)定水解后的單糖含量對(duì)總糖進(jìn)行測(cè)定。

   DNS試劑是植物總糖和還原糖檢測(cè)(硝基水楊酸法)的成分之一,其檢測(cè)原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物。在一定范圍內(nèi),還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系。在540nm處測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光度,該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系,利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得樣品中的還原糖和總糖的含量。本試劑僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料:

1、蒸餾水

250mL離心管

3、離心機(jī)

4、水浴鍋或恒溫箱

5、分光光度計(jì)

6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

操作步驟:(僅供參考)

1、還原糖的提?。?/span>

1)稱取植物樣品0.5-3g,剪碎,加入蒸餾水約3mL勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用12mL蒸餾水沖洗研磨器2-3次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

250°C水浴30min,并不時(shí)攪拌,以便還原糖*浸出。

3)將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至50mL離心管,4000g離心5min。

4)留取上清液,向沉淀中加入20mL蒸餾水,混勻,再次4000g離心5min。

5)留取上清液,將二次獲得的上清液合并,用蒸餾水定容至100mL(提取液),混勻,作為還原糖待測(cè)液。

2、總糖的水解和提取:

1)稱取植物樣品0.5-3g,剪碎,加入蒸餾水約3mL勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用12mL蒸餾水沖洗研磨器2-3次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

2)向容器中加入10mL 6M 鹽酸溶液,攪拌均勻,煮沸30min,并不時(shí)攪拌。

3)取兩滴滴加于載玻片上,滴加一滴顯色液,檢查水解是否*,如已經(jīng)水解*,則不顯示藍(lán)色。

4)水解完畢后,冷卻至室溫,加入6M氫氧化鈉溶液,使溶液pH7.4,用蒸餾水定容至100mL,混勻,4000g離心5min或過濾。

5)取上清或?yàn)V液10mL,用蒸餾水定容至100mL,成稀釋1000倍的總糖水解液(提取液),取1mL總糖水解液,測(cè)定其還原糖的含量。

3、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線:取干凈離心管或試管,按下表進(jìn)行操作,以0號(hào)調(diào)零,檢測(cè)540nm處吸光度,以吸光度值為縱坐標(biāo),各標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

加入物質(zhì)(mL

0

1

2

3

4

5

Glu標(biāo)準(zhǔn)(1mg/mL

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

蒸餾水

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

0

DNS試劑

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

2.0

沸水浴中準(zhǔn)確煮沸5min,取出,自來水冷卻至室溫。

蒸餾水

9.0

9.0

9.0

9.0

9.0

9.0

相當(dāng)于葡萄糖量

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

4、還原糖測(cè)定:取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液1mL,分別加入DNS試劑2mL,其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作,540nm處測(cè)定各管的吸光度。

計(jì)算:

還原糖的百分含量(%=C×VT/m×VS×100

總糖的百分含量:

總糖含量(%=C×VT/m×VS×100×10×0.9

式中:C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg

     VT=提取液的體積(mL

     m=植物樣品的質(zhì)量(mg

     VS=測(cè)定時(shí)用的樣品體積(mL

注意事項(xiàng):

1、上述低溫試劑避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降。

2、待測(cè)樣本如不能及時(shí)測(cè)定,應(yīng)置于2-8°C保存,3天內(nèi)穩(wěn)定。

3、如果樣品還原糖濃度過高,應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè),結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

4、總糖 計(jì)算公式在測(cè)定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對(duì)總糖含量很少時(shí)使用,×0.9是為了從測(cè)定出的總糖水解成單糖中,扣除水解時(shí)所消耗的水量。

相關(guān)文獻(xiàn):

[1] Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali. Microbial Pathogenesis. October 2018;132-138. (IF 2.332)




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