產(chǎn)品名稱:ATP含量檢測試劑盒 微量法
產(chǎn)品型號:BC0305
產(chǎn)品特點:ATP含量檢測試劑盒 微量法測定意義:ATP廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測定ATP含量并且計算能荷,2、蛋白質(zhì)含量 3.5%~5.0%( w/v)3、血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)4、無菌檢驗 陰性5、支原體檢驗 陰性6、細菌內(nèi)毒素 ≤5(EU/ml)7、牛腹瀉病毒 陰
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ATP含量檢測試劑盒 微量法
ATP 含量檢測試劑盒說明書
微量法
產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓
英文名稱:ATP content detection kit
產(chǎn)品商標:solarbio
注意:正式測定前務(wù)必取2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
貨號:BC0305
規(guī)格:100T/96S
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存;
參考價格:1560
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞:ATP含量檢測|ATP含量|ATP|
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體20mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入3.5mL 蒸餾水充分溶解,可加熱促進溶解;
試劑三:液體4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前每支加入0.4mL 蒸餾水溶解,可分裝后-20℃保存,避免反復(fù)凍融;
試劑五:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入1mL 蒸餾水;
試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入0.5mL 蒸餾水備用,可分裝后-20℃保存,避免反復(fù)凍融;
標準品:粉劑×1 支,-20℃保存。5mg ATP,臨用前加入0.826mL 蒸餾水配成10μmol/mL 的ATP標準溶液。
產(chǎn)品說明:
ATP 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測定ATP 含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。
HK 催化葡萄糖和ATP 合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH,NADPH 在340nm 有特征吸收峰,NADPH 和ATP 含量成正比,以此反應(yīng)ATP 含量。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/ 96 孔UV 板、研缽/勻漿器、蒸餾水和lv仿。
操作步驟:
一、ATP 的提?。?/span>
1、血清(漿)中ATP 的提取:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議取約0.1mL 血清(漿),加入1mL 提取液),充分震蕩,10000g,4℃離心10min;取上清液另一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心3min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。
2、組織中ATP 的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL 提取液),進行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清另一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心3min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。
3、細胞或細菌中ATP 的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內(nèi),棄上清,按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提取液),超聲波破碎1min(冰浴,強度20%或200W,超聲2s,停1s),10000g 4 ℃離心10min;取上清液另一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心3min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。
二、測定步驟:
1、紫外分光光度計/酶標儀預(yù)熱30 min 以上,調(diào)節(jié)波長到340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、將10μmol/mL 的ATP 標準溶液用蒸餾水稀釋16 倍即0.625 μmol/mL 標準溶液備用。
3、工作液的配制:臨用前請按試劑二(mL):試劑三(mL):試劑四(mL):試劑五(mL):試劑六(mL)=1:1:0.1:0.4:0.1 的比例配制,現(xiàn)配現(xiàn)用。
4、加樣表
在微量石英比色皿或96 孔UV 板中加入:
試劑名稱(μL) 測定管 標準管
樣本 20
標準液 20
試劑一 128 128
工作液 52 52
充分混合后,立即測定340nm 下10s 的吸光值A(chǔ)1,然后將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)水浴中反應(yīng)3min,拿出擦拭干凈立即測定其在3min10s 時的吸光值A(chǔ)2。用96 孔板則放入37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)培養(yǎng)箱中(酶標儀若自帶控溫功能,則將溫度調(diào)37℃或25℃)。分別計算ΔA 測定=A2 測定管-A1 測定管,ΔA 標準=A2標準管-A1 標準管
三、ATP 含量計算:
1、血清(漿)中ATP 含量計算
ATP 含量(μmol/mL) =ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準)×(V 提取+V 血清(漿))÷V 血清(漿)=6.875×ΔA 測定÷ΔA 標準
2、組織、細菌或細胞中ATP 含量計算
(1) 按樣本鮮重計算
ATP 含量(μmol/g 鮮重)= ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準)×V 提取÷W=0.625×ΔA 測定÷ΔA 標準÷W
(2) 按細菌或細胞密度計算
ATP 含量(μmol/106 cell)=ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準)×V 提取÷5=0.125×ΔA 測定÷ΔA 標準
C 標準管:標準液濃度,0.625μmol/mL;
V 提取:加入的提取液體積,1mL;
V 血清(血漿):血清(漿)體積,0.1mL;
W:樣本質(zhì)量,g;
5:細胞或細菌總數(shù),5×106 個。
注意事項
1、加入提取液離心后的上清若為渾濁為正?,F(xiàn)象。
2、提取過程嚴格在冰浴條件下進行。
3、用微量石英比色皿測量的吸光值大于1.4 或者ΔA 測定大于1.2 時(石英96 孔板的吸光值大于1.4 或者ΔA 測定大于1.2 時),可以將樣品稀釋后進行測定。若吸光值小于0.01,則可以增加反應(yīng)時間(5min 或10min)來測定,標準品需要增加同樣的反應(yīng)時間。
相關(guān)文獻:
《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death & Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury》 作者:Yang Wang,Jianhang Jiao,Shanyong Zhang,Changjun Zheng,Minfei Wu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:31146112
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448
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