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基因工程試劑 DH5α感受態(tài)細(xì)胞
貨 號：C1100
規(guī) 格：10×100ul / 20×100ul
保 存：-70℃保存，運(yùn)輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存少一年，-70℃保存少6個月。

產(chǎn)品簡介：
    本公司生產(chǎn)的DH5α感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 10 8 ，-70℃保存 3-5 個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
    基因型: supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特 點(diǎn): 一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的產(chǎn)物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) β 互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1、將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實(shí)驗(yàn)以 100ul 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置 30 分鐘。
3、將離心管置于 42℃水浴中 60-90 秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動離心管。
4、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基，37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng) 1 小時。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取 100ul 左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如轉(zhuǎn)化的 DNA總量較少，可取 200-300ul 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長。如果預(yù)計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。
2、實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3、轉(zhuǎn)化時，轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時 DNA 體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。
4、轉(zhuǎn)化率的計算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板 DNA 總量。
5、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。

相關(guān)產(chǎn)品：

I1020  IPTG  溶液 (50mg/ml)
A1170 氨芐青霉素儲存液 (100mg/ml)
K1030  Kanamycin (100mg/ml) 卡那霉素
L1015  LB 固體培養(yǎng)基 ( 干粉 )
L1020  SOC 液體培養(yǎng)基 ( 干粉 )
X1010  X-gal(20mg/ml)

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者:Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影響因子:4.402 PMID:30711013
 

基因工程試劑 DH5α感受態(tài)細(xì)胞訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
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