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過氧化氫酶（CAT）測定試劑盒 微量法說明書

貨號: BC0205 規(guī)格:100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容： 提取液：100mL×1 瓶，4℃保存； 工作液：24mL×1 瓶，4℃保存；

產(chǎn)品簡介： CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是主要的 H2O2清除酶，在活性氧清除系 統(tǒng)中具有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能夠分解 H2O2，使反應(yīng)溶液 240nm 下的吸光度隨反應(yīng)時間而下降，根 據(jù)吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。

過氧化氫酶（CAT）測定試劑盒 微量法操作步驟：

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

二、操作步驟 1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 240nm，蒸餾水調(diào)零。 2、 測定前將 CAT 檢測工作液 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴 10min。 3、 加入 10μL 樣本和 190μL 工作液，混勻 5s 或者在酶標儀上振動 5s 并立即計時，記錄 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2

三、CAT 活性計算（用石英比色皿）：

1、 血清（漿）CAT 活力的計算: 單位的定義：每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mL）＝反應(yīng)總體積÷樣本體積÷反應(yīng)時間÷H2O2消光系數(shù)（43.6×10 -3）×ΔA=459×ΔA

2、 組織 CAT 活力計算： （1） 按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mg prot）＝反應(yīng)總體積÷樣本體積÷反應(yīng)時間÷H2O2消光系數(shù)（43.6×10 -3）×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL） =459×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL） （2） 按樣本鮮重計算： 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/g mass）＝反應(yīng)總體積÷樣本體積÷反應(yīng)時間÷H2O2 消光系數(shù)（4.36×10 4）×ΔA÷樣本鮮重（g/mL） =459×ΔA÷樣本鮮重（g/mL）

3、 細菌或細胞中 CAT 活力計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/10 4 cell）＝反應(yīng)總體積÷樣本體積÷反應(yīng)時間÷H2O2消光系數(shù)（4.36×10 4）×ΔA÷細胞密度（10 4 cell /mL） =0.917×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4L；ε: NADH 摩爾吸光系數(shù)，4.36×10 4L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm； V 樣：加入樣本體積，0.01ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，1min。W，樣本質(zhì)量，g；Cpr： 上清液蛋白濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬。

CAT 活性計算（用 96 孔板）：

1、 血清（漿）CAT 活力的計算: 單位的定義：每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mL）＝反應(yīng)總體積÷樣本體積÷反應(yīng)時間÷H2O2消光系數(shù)（4.36×10 4）×ΔA=918×ΔA

2、 組織 CAT 活力計算： （1） 按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mg prot）＝反應(yīng)總體積÷樣本體積÷反應(yīng)時間÷H2O2消光系數(shù)（4.36×10 4）×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL） =918×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL） （2） 按樣本鮮重計算： 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/g mass）＝反應(yīng)總體積÷樣本體積÷反應(yīng)時間÷H2O2 消光系數(shù)（4.36×10 4）×ΔA÷樣本鮮重（g/mL） =918×ΔA÷樣本鮮重（g/mL）

3、 細菌或細胞中 CAT 活力計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/10 4 cell）＝反應(yīng)總體積÷樣本體積÷反應(yīng)時間÷H2O2消光系數(shù)（4.36×10 4）×ΔA÷細胞密度（10 4 cell /mL） =1.836×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10 -4L；ε: NADH 摩爾吸光系數(shù)，4.36×10 4L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm； V 樣：加入樣本體積，0.01ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，1min。W，樣本質(zhì)量，g；Cpr： 上清液蛋白濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬。 1、 預(yù)實驗如果發(fā)現(xiàn)酶活性過高（其實 OD 值過大），可用提取液適當(dāng)稀釋樣品。 2、 如果酶活性過低，延長反應(yīng)時間（3 分鐘之內(nèi)），并將反應(yīng)時間準確代入計算公式。

一、粗酶液提取： 1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

相關(guān)文獻：
《Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton》 作者:Yanan Wang，Chengzhen Liang，Zhigang Meng，Yanyan Li，Muhammad Ali Abid，Muhammad Askari，Peilin Wang，Yuan Wang，Guoqing Sun，Yongping Cai，Shou-Yi Chen，Yi Lin，Rui Zhang，Sandui Guo 期刊:Environmental and Experimental Botany 影響因子:3.712 PMID:
《The Fight Against Panax notoginseng Root-Rot Disease Using Zingiberaceae Essential Oils as Potential Weapons》 作者:Yan-Jiao Yin, Chuan-Jiao Chen, Shi-Wei Guo, Ke-Ming Li, Yu-Nan Ma, Wu-Mei Sun, Fu-Rong Xu, Yong-Xian Cheng and Xian Dong 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.716 PMID:30337932
《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影響因子:3.547 PMID:28189720
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《Identification, Expression, and Functional Analysis of the Group IId WRKY Subfamily in Upland Cotton (Gossypium hirsutum L.)》 作者:Lijiao Gu1, Hantao Wang, Hengling Wei, Huiru Sun, Libei Li, Pengyun Chen, Mohammed Elasad, Zhengzheng Su, Chi Zhang, Liang Ma, Congcong Wang and Shuxun Yu 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:
《Extracellular degradation of tetrabromobisphenol A via biogenic reactive oxygen species by a marine Pseudoalteromonas sp》 作者:Chen Gu,Jing Wang,Mengfan Guo,Meng Sui,Hong Lu,Guangfei Liu 期刊:Water Research 影響因子:7.913 PMID:29908463
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《Geobacter sulfurreducens-inoculated bioelectrochemical system reveals the potential of metabolic current in defining the effect of extremely low-frequency electromagnetic field on living cells.》 作者:ZhenhuaShi 期刊:Ecotoxicol. Environ. Saf. 影響因子:4.527 PMID:30743077
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GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。