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甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒

操作步驟：

一、 TG 的提取：

1、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清待測。

2、 細胞、細菌：先收集 400-500 萬細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，加 1mL 試劑一，超聲波破碎 1min（強度 20％，超聲 2s，停 1s），8000g， 4℃離心 10min，取上清待測。

3、 血清（漿）等液體樣品：直接測定。

二、 測定操作：

1. 分光光度計預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 420 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 水浴鍋預(yù)熱到 65℃?？瞻坠?標準管 測定管雙蒸水（μL） 40 標準液（μL） 40 TG 待測液（μL） 40 試劑一（μL） 125 125 125 試劑二（μL） 25 25 25 加試劑一后充分混勻，再加試劑二，劇烈振蕩 30s，靜置，待分層后取上層溶液 30μL，置于新的 EP 管中。

3．甘油三酯含量測定：空白管 標準管 測定管上層溶液（μL） 30 30 30 試劑三 （μL） 100 100 100 試劑四（μL） 30 30 30 充分混勻，65℃水浴 3min 試劑五（μL） 100 100 100 試劑六（μL） 100 100 100 充分混勻，65℃水浴 15min 取出 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板測定 420nm 處吸光度，記為 A 空，A 標和 A 測。注意：空白管和標準管只需測定一次。

甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1. 血清（漿）中甘油三酯含量： TG 含量（mg/dL）=C 標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）×100 mL =100×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空） C 標準品：1mg/mL；100mL：血清體積，1dL=100 mL。

2. 組織中甘油三酯含量： (1)按樣本蛋白濃度計算 TG 含量（mg/ mg prot）= C 標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷Cpr =（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷ Cpr (2)按樣本質(zhì)量計算 TG 含量（mg/ g）=C 標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷W =（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷ W C 標準品：1mg/mL ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g/mL

3. 細胞、細菌中甘油三酯含量： TG 含量（mg/104 cell）=C 標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷細菌或細胞（104 cell /mL） =（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷細菌或細胞（104 cell /mL） C 標準品：1mg/mL。

b.使用 96 孔板測定的計算公式如下

1. 血清（漿）中甘油三酯含量： TG 含量（mg/dL）=C 標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）×100 mL =100×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空） C 標準品：1mg/mL；100mL：血清體積，1dL=100 mL。

2. 組織中甘油三酯含量： (1)按樣本蛋白濃度計算 TG 含量（mg/ mg prot）= C 標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷Cpr =（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷ Cpr (2)按樣本質(zhì)量計算 TG 含量（mg/ g）=C 標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷W =（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷ W C 標準品：1mg/mL ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g/mL

3. 細胞、細菌中甘油三酯含量： TG 含量（mg/104 cell）=C 標準品×（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷細菌或細胞（104 cell /mL） =（A 測－A 空）÷（A 標－A 空）÷細菌或細胞（104 cell /mL） C 標準品：1mg/mL。

注意事項：

1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實驗過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應(yīng)該及時蓋緊。

2. 加試劑二后需劇烈震蕩，使待測液中甘油三酯得到充分提取。

3. 檢出限為 100μ mol/L。

試劑一：自備，取玻璃空瓶，加入 45mL 正庚烷，80mL 異丙醇，蓋緊后混勻，4℃保存。

劑二：液體 3mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑六：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。標準品：液體 5mL×1 瓶，1mg/mL 甘油三酯標準溶液，4℃保存。

相關(guān)文獻:

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